ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡(jiǎn)稱(chēng)。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)際應(yīng)用中，通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。
1. 試劑
(1) 包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液):NaCO31.59克 NaHCO3 2.93克 加蒸餾水至1000ml
(2) 洗滌緩沖液(PH7.4PBS)：0.15M KH2PO40.2克 Na2HPO4·12H2O 2.9克 NaCl8.0克KCl0.2克Tween-200.05%0.5ml加蒸餾水至1000ml
(3) 稀釋液:牛血清白蛋白(BSA)0.1克 加洗滌緩沖液至100ml 或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。
(4) 終止液(2MH2SO4)：蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。
(5) 底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml 0.1M檸檬酸(19.2克/L)24.3ml 加蒸餾水50ml。
(6) TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:TMB(10mg/5ml無(wú)水乙醇)0.5ml底物緩沖液(PH5.5)10ml0.75%H2O232μl
(7) ABTS使用液:ABTS 0.5mg 底物緩沖液(PH5.5)1ml 3%H2O2 2μl
(8) 抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體。
(9) 正常人血清和陽(yáng)性對(duì)照血清。
2. 器材:
(1) 聚苯乙烯塑料板(簡(jiǎn)稱(chēng)酶標(biāo)板)40孔或96孔，ELISA檢測(cè)儀，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭，小毛巾，洗滌瓶。
(2) 小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。
(3) 4℃冰箱，37℃孵育箱。
