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PCR檢測試劑盒?PCR反應(yīng)引物設(shè)計原則
  • 發(fā)布日期:2025-02-17      瀏覽次數(shù):1189
    • PCR檢測試劑盒PCR反應(yīng)引物設(shè)計原則:
      PCR反應(yīng)中有兩條引物,即5′端引物和3′引物。設(shè)計引物時以一條DNA單鏈為基準(常以信息鏈為基準),5′端引物與位于待擴增片段5′端上的一小段DNA序列相同;3′端引物與位于待擴增片段3′端的一小段DNA序列互補。PCR檢測試劑盒PCR反應(yīng)引物設(shè)計的基本原則如下:
      (1)  引物長度:15-30 bp,常用為20 bp左右。
      (2) 引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C 過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
      (3) 引物內(nèi)部不應(yīng)出現(xiàn)互補序列。

      (4)兩個引物之間不應(yīng)存在互補序列,尤其是避免3 ′端的互補重疊。

      (5) 引物與非特異擴增區(qū)的序列的同源性不要超過70%,引物3′末端連續(xù)8個堿基在待擴增區(qū)以外不能有全互補序列,否則易導(dǎo)致非特異性擴增。

      (6)引物3‘端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,選擇是G和C。
      (7) 引物的5 ′端可以修飾。如附加限制酶位點,引入突變位點,用生物su、熒光物質(zhì)、di 高辛標記,加入其它短序列,包括起始密碼子、終止密碼子等。


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