公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細(xì)胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

公司正在出售的產(chǎn)品：

LI-cadherin： 肝腸鈣粘連蛋白抗體 CDH5 Others Mouse 小鼠 CDH5 / CD144 / VE-Cad 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

胰腺星狀細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) 大鼠再生胰島衍生蛋白3α(REG3α)ELISA試劑盒 Goat Anti-human IgA/Gold 金標(biāo)記羊抗人IgA(10nm/15nm) 0.5ml

Layilin： 透明質(zhì)酸受體抗體 小鼠肝癌細(xì)胞;Hepa 1-6 [Hepa1-6]

EB (NBL-4) (牛胚氣管細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 大鼠垂體細(xì)胞RPC 大鼠再生基因蛋白IV(REG-4)ELISA試劑盒 IgA/Gold 金標(biāo)記兔抗人IgA(10nm/15nm) 0.5ml

C17orf82： 17號(hào)染色體開放閱讀框82抗體 CM-M057小鼠腎系膜細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

SF767細(xì)胞，人腦瘤細(xì)胞 陰溝腸桿菌 人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHAEC NA 人抗平滑肌抗體(ASMA)ELISA 試劑盒 apoA1 (Apolipoprotein/APOA1 protein )human 載脂蛋白A1抗原 0.5mg

HIAT1： 海馬豐富基因轉(zhuǎn)錄蛋白1抗體 HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Hong kong/213/03) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

小鼠腎集合管細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化);M-1 人抗皮膚抗體(ASA)ELISA 試劑盒 Apo J/Clusterin- Alpha/ Beta(Apolipoprotein J) 凝聚素α/β抗原 0.5mg

Histone H2A.Z： 組蛋白H2AZ抗體 人羊膜細(xì)胞;WISH

GBC-SD(人膽囊癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0312293ET(人胚腎細(xì)胞(SV40T和EBNA1基因修飾細(xì)胞))5×106cells/瓶×2 盤羊皮膚細(xì)胞;ASHS3 人抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)ELISA 試劑盒 Insulin Receptor-Alpha(ISR-Alpha) 胰島素受體-α(抗原) 0.5mg

CAOV-3人卵巢腺癌細(xì)胞人胚肺成纖維細(xì)胞;MRC-5 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA 試劑盒 F-TESTO(Mouse Free Testoterone) 小鼠游離睪酮 96T

Plexin A3： 神經(jīng)叢蛋白A3抗體 狗腎細(xì)胞;Super Tube

大鼠中腦縫神經(jīng)細(xì)胞(腦脊)(RNr)(1×106) WM35, 人黑色素瘤細(xì)胞 Human 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)ELISA試劑盒 T(Mouse Testoterone) 小鼠睪酮 96T

phospho-PTPN6(Tyr564)： 0酸化蛋白酪酸0酸酶1C抗體 人淋巴成纖維細(xì)胞cDNAHLF cDNA

TNFSF11 Protein Human 重組人 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)ELISA 試劑盒 PL12/AlaRS(Human anti-PL12-antibody)  人PL12抗體 PARP1 Others Human 人 PARP-1 / PARP 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng) 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。