公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀(guān)察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細(xì)胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀(guān)察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過(guò)夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

一、商品介紹：

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

公司正在出售的產(chǎn)品：

NCSTN Others Mouse 小鼠 Nicasin / NCSTN 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA 試劑盒 Rb Anti-FITC/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗FITC 0.3ml

Lactic acid bacterial protein surface： 乳酸菌菌體表面蛋白抗體 大鼠雪旺細(xì)胞;RSC96

R 1610倉(cāng)鼠肺細(xì)胞 R 1610 hamster lung cells DMEM+10%FBS 大鼠脂多糖/內(nèi)毒素(LPS)ELISA試劑盒 Streptavidin/RBITC 紅色熒光素羅丹明標(biāo)記鏈霉親和素 0.3ml

Layilin： 透明質(zhì)酸受體抗體 PCSK9 Others Mouse 小鼠 PCSK9 / NARC1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

直結(jié)腸平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) 大鼠脂多糖(LPS)ELISA試劑盒 Rabbit IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記兔IgG(細(xì)胞流式同型對(duì)照) 0.3ml

HSP90 beta： 熱休克蛋白90β/HSP90 β 抗體 犬腎細(xì)胞;MDCK(NBL-2) 腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞，Y1細(xì)胞 RCFBF細(xì)胞，兔角膜前基質(zhì)層成纖維細(xì)胞

GP1BB Others Rat 大鼠 GP1BB / CD42c 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 人抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISA 試劑盒 GLUT2(Glucose transporter type 2) 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(抗原) 0.5mg

HCMV UL23： 人巨細(xì)胞病毒UL23抗體 AGS人胃腺癌細(xì)胞

ECV-304細(xì)胞，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 銅綠假單胞桿菌(綠膿桿菌) 人真皮成纖維細(xì)胞-總RNAHDF-a NA 人抗心0脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA 試劑盒 ANP(atrial natriuretic peptide) 心肽(心素)抗原 0.5mg

HECA： HECA蛋白抗體 HA Others H5N8 甲型流感 H5N8 (A/duck/NY/191255-59/2002) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

ATDC5小鼠胚胎瘤細(xì)胞POU6F2： 轉(zhuǎn)錄因子RPF1抗體 U937細(xì)胞，組織細(xì)胞淋巴瘤 人肺巨細(xì)胞癌(PG)的低轉(zhuǎn)移亞系,PG-LH7細(xì)胞 腸動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

ADAM9 Others Mouse 小鼠 ADAM9 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 大鼠甲狀旁腺激素(PTH)ELISA試劑盒 LIFR  大鼠白血病抑制因子受體 96T

PHAP1： 蛋酸酶2A抑制劑1抗體 CL-0292MKN45(人胃癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

2V6.11人胚腎細(xì)胞 Human embryonic kidney cell line 2V6.11 MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS 大鼠甲狀旁腺激素(PTH) ELISA 試劑盒 FT4(Mouse Free Thyroxine)  小鼠游離甲狀腺素 96T

Pinin： 橋粒相關(guān)蛋白DRS抗體 VCAM1 Others Human 人 CD106 / VCAM1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng) 

1. 收到細(xì)胞后首先觀(guān)察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由 客戶(hù)自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀(guān)察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪(fǎng)直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。