公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

商品屬性

保存條件：本試劑盒在室溫儲存 12 個月不影響使用效果。
產品介紹：
結合液/蛋白酶 K 迅速裂解細胞和滅活細胞內核酸酶，然后基因組 DNA 在 高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的 步驟，抑制物去除液和漂洗液將細胞代謝物、蛋白等雜質去除，最后低鹽的洗脫緩沖 液將純凈基因組 DNA 從硅基質膜上洗脫。
產品特點：
1.重復性好:離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小?？朔藝a試劑盒膜質量不穩(wěn)定的弊端。
2.多次柱漂洗確保高純度，OD260/OD280 典型的比值達 1.7～1.9，長度可達 30kb -50kb，可直接用于 PCR，Southern-blot 和各種酶切反應。
注意事項：
1.結合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在 37℃水浴幾分 鐘幫助重新溶解，恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2.避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發(fā)、氧化、pH 值變化。
3.結合液 CB 和抑制物去除液 IR 中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

4.洗脫液 EB 不含有螯合劑 EDTA，不影響下游酶切、連接等反應。也可以使用水洗脫， 但應該確保批 pH 大于 7.5，pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫 DNA 應該保存在-20℃。 DNA 如果需要長期保存，可以用 TE 緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是 EDTA 可能影響下游酶切反應，使用時可以適當稀釋。
自備試劑：無水乙醇、1xPBS 緩沖液、RNase A（10mg/ml）（RNase A(10 mg/ml) 有售）。
操作步驟：
提示：第一次使用前請先在漂洗液 WB 中加入定量無水乙醇，充分混勻，加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!
如果需要去除 RNA，可在加蛋白酶 K 溶液前先加入 4μl RNaseA（10mg/ml）溶液振蕩 15sec，室溫放置 5 min

1.組織培養(yǎng)細胞
a. 收集約 105-10
6懸浮細胞到一個 1.5ml 離心管；對于貼壁細胞，應該先用胰蛋白消化后吹打下來收集。
b. 12,000rpm 離心 10 sec，使細胞沉淀下來。棄上清，留下細胞團和大約 10-20μl殘留的液體。
c. 加 200μl 1×PBS 重懸洗滌細胞，12,000rpm 離心 10 sec，使細胞沉淀下來。棄上清, 將細胞沉淀重懸于 180μl 1XPBS 中。
d. 加入 20μl 蛋白酶 K (20mg/ml)溶液，充分混勻（可選步驟：為清除 RNA，加入 5µl RNase A（10mg/ml），振蕩混勻，可選擇室溫放置 5min），再加入 200μl結合液 CB，立刻渦旋振蕩充分混勻，在 70℃放置 10 min。
e. 冷卻后入 200μl 無水乙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀。
f. 將上一步混合物（包括可能有的沉淀）加入吸附柱 AC 中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm 離心 1 min，倒掉收集管中的廢液。
g. 按操作步驟 4 繼續(xù)后續(xù)的實驗。
2.動植物組織（例如鼠肝腦或者植物葉片）
a. 新鮮或者解凍的組織在液氮中研磨成細粉后或者用解剖切成小碎塊（切成微塊可以提高產量）后取 20-50mg，轉入裝有 180μl 組織裂解液 TL 的 1.5ml 離心管中， 用大口徑槍頭吹打混勻。
b. 加入 20μl 的蛋白酶 K 溶液(20mg/ml)，立刻渦旋振蕩充分混勻。
c. 將裂解物放置在 55℃水浴 1-3 小時或者直到組織消化全，期間輕柔的振蕩幾次幫助裂解。為清除 RNA，加入 5µl RNase A（10mg/ml），振蕩混勻（可選擇室溫放置 5 min）。
d. 加入 200μl 結合液 CB，立刻渦旋振蕩充分混勻，70℃放置 10 min。
e. 冷卻后加入 200μl 無水乙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀。
f. 用 1ml 的槍頭吸取混合物，將混合物加入一個吸附柱 AC 中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm 離心 1 min，倒掉收集管中的廢液。
g. 按操作步驟 4 繼續(xù)后續(xù)的實驗。
3.動物組織（鼠尾）
a.將 0.2-0.5cm 的鼠尾巴尖(即 20-50mg)剪碎（一定要剪 0-2cm 范圍內的尾巴尖，否則裂解效果不好），或者在液氮中研磨組織成細粉后，轉入裝有 180μl 組織裂解液 TL 的 1.5ml 離心管中， 用大口徑槍頭吹打混勻。
b.加入 20μl 的蛋白酶 K(20mg/ml)，立刻渦旋振蕩充分混勻。
c.將裂解物放置在 55℃水浴 3 小時或者直到組織消化全，期間輕柔的振蕩幾次幫助裂解。為清除 RNA，加入 5µl RNase A（10mg/ml），振蕩混勻（可選擇室溫放置 5 min）。
d.用一個 1ml 不帶針頭的一次性輸液抽打裂解物 2-3 次。
e.加入 200μl 結合液 CB 和 200μl 無水乙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻。
f.12,000rpm 離心 5 min，將上清加入一個吸附柱 AC 中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm 離心 30-60 sec，倒掉收集管中的廢液。
g.按操作步驟 4 繼續(xù)后續(xù)的實驗。
4.加入 500μl 抑制物去除液 IR，12,000rpm 離心 30 sec，棄廢液。
5.加入 500μl 漂洗液 WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm 離心 30 sec，棄掉廢液。
6.重復操作步驟 5。
7.將吸附柱 AC 放回空收集管中，12,000rpm 離心 2 min，將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘，以晾干吸附材料中殘余的漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。
8. 取出吸附柱 AC，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加 50-100 洗脫緩沖液 EB（洗脫緩沖液事先在 65℃水浴中預熱效果更好），室溫放置 3-5 min，12,000rpm 離心 1 min。為了增加基因組 DNA的得率，將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置 2 min，12,000rpm 離心 1 min。(注意: DNA 產物應保存在-20℃，以防 DNA降解。)

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