公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（

FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

3、細胞復(fù)蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)

晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至含 6ml 培養(yǎng)基的 15ml 離心管中， 1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀用 6ml 培養(yǎng)基重懸，接種 25cm2培養(yǎng)瓶，于 37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

收到細胞后如何操作:

1、首先，觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請及時與我司技術(shù)支持聯(lián)系。

2、用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)，隔天再取出進行觀察。

3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等。

4、可將培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管中，備用；細胞傳代時，可以將該培養(yǎng)基按照一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合使用，讓細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

5、確認細胞狀態(tài)良好后，應(yīng)及時將細胞凍存，再進行后續(xù)的實驗，避免后期實驗失誤可能發(fā)生細胞污染或死亡而導(dǎo)致的細胞丟失。

6、建議客戶收到細胞后前3天，100X、200X、400X各拍3-5張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我們技術(shù)支持溝通交流。

細胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

    a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        

     c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

     b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。  

三、培養(yǎng)注意事項 

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。     收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

Phospho-LAT (Tyr161)： 0酸化T細胞活化連接蛋白抗體 MiaPaCa-2, 人胰腺癌細胞 非雄激素依賴型前列腺癌,Tsu-Pr1細胞 ZR-75-1(癌細胞)

HA Others H10N9 甲型流感 H10N9 (A/duck/HongKong/562/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) 大鼠重肽神經(jīng)絲蛋白(NEFH)ELISA試劑盒 Monkey IgG/Cy3 熒光素Cy3標(biāo)記猴IgG 0.1ml

Phospho-LAT (Tyr200)： 0酸化T細胞活化連接蛋白抗體 豚鼠皮膚細胞;GP-S3

Raji人Butt's淋巴瘤細胞 Raji human Butt's lymphoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS 大鼠腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因KISS1蛋白(KISS1/Kisspeptin 1)ELISA試劑盒 Monkey IgM/Cy3 熒光素Cy3標(biāo)記猴IgM 0.1ml

LRP1/CD91： 低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1抗體 SERPINA7 Others Human 人 SerpinA7 / TBG 人細胞裂解液 (陽性對照)

GPR85： G蛋白偶聯(lián)受體GPR85蛋白抗體 家貓腎細胞;CATK1 肝細胞，HL-7702細胞 MMQ細胞，大鼠垂體瘤細胞

IGFBP4 Others Cynomolgus 食蟹猴 IGFBP4 人細胞裂解液 (陽性對照) 人狂犬病抗體(RV-Ab)ELISA試劑盒 Caspase-3 (CPP32) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-3(抗原) 0.5mg

Gentamicin： 抗體 神經(jīng)少突起前質(zhì)膠質(zhì)細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

Hat-78細胞，人T細胞淋巴瘤 小鼠腎癌細胞,Ranca細胞 人食道平滑肌細胞cDNAHESMC cDNA 人狂犬病毒抗原ELISA試劑盒 Caspase-6 (CT) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-6(抗原) 0.5mg

Galectin 9： 半乳糖凝集素9抗體 RBP4 Others Mouse 小鼠 RBP4 人細胞裂解液 (陽性對照)

A2058人黑色素瘤細胞人導(dǎo)管癌細胞;ZR-75-1 大鼠精酸加壓素(AVP)ELISA試劑盒 MHC III /AgB III /H-1 III  大鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類 96T

phospho-PIK3 gamma (Thr1024)： 0酸化0脂酰肌醇激酶PIK3-γ抗體 貓星形腦膠質(zhì)細胞;PG-4(S+L-)

人小梁網(wǎng)細胞(HTMC)(5×105) 3T3-L1, 小鼠前脂肪細胞 Mouse 大鼠精酸(Arg)ELISA試劑盒 MHC II /AgB II /H-1 II  大鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類 96T

PBX1： B淋巴細胞白血病前體蛋白轉(zhuǎn)錄因子1抗體 人臍靜脈內(nèi)皮細胞總RNAHUVEC NA

CD40LG Protein Rat 重組大鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) 大鼠精胺脲水解酶(AGMAT)ELISA試劑盒 pANCA(Mouse Perinuclear anti-neutrophil cytoplasmic antibody)  小鼠抗中性粒細胞核周抗體 ACBD6 Others Human 人 ACBD6 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)