公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

    a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        

     c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。

     b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。  

三、培養(yǎng)注意事項 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

Megsin： 絲酸蛋白酶抑制劑B7抗體 中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-E1

IL36G Protein Human 重組人 IL36G / IL1F9 蛋白 (aa 18-169, His 標(biāo)簽) 大鼠纖維蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒 P-cad(Human Placenta Cadherin)  人P鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白 96T

Mfn1： 線粒體融合蛋白1抗體 ELK1 Others Human 人 ELK1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

大鼠牙細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠纖維蛋白原γ鏈(Fgg)ELISA試劑盒 MUC5AC(Mouse Mucin-5 subtype AC)  小鼠粘蛋白/粘液素5AC 96T

MGMT： O6甲基DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抗體 QGY-7701細(xì)胞，肝癌細(xì)胞 人宮頸上皮細(xì)胞癌,Ski細(xì)胞 KM小鼠子瘤株;U27

MDBK(牛腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 EphB2 / Hek5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 人對基苯(PABA)ELISA 試劑盒 GFP 綠色熒光蛋白 0.5mg

Hepatitis E Virus ORF3： 戊型肝炎病毒抗體 腦膜細(xì)胞生長添加物MenCGS

CCL20 Protein Human 重組人 CCL20 / MIP-3 alpha 蛋白 (His 標(biāo)簽) 人對環(huán)0酰胺(CTX)ELISA 試劑盒 GITR (glucocorticoidinduced tumor necrosis factor receptor) 糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)壞死因子受體抗原 0.5mg

HRG1： 神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1抗體 IL6ST Others Mouse 小鼠 IL6ST / CD130 CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 人端粒酶(TE)ELISA 試劑盒 GLI1(GLI-Kruppel family member 1) 下游轉(zhuǎn)錄因子Gli1蛋白抗原 0.5mg

HT-1080人纖維肉瘤細(xì)胞Phospho-PLK1 (Ser137)： 0酸化絲/蘇酸蛋白激酶Plk1抗體 原代骨細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/250/100

DKK1 Protein Rhesus 重組恒河猴 DKK-1 / Dkk1 蛋白 (256 Asn/Gln, His 標(biāo)簽) 大鼠多配體蛋白聚糖4(SDC4)ELISA試劑盒 ADM(Human adrenomedullin)  人腎上腺髓質(zhì)素 96T

Phospho-PNK1 (Ser114 + Thr118)： 0酸化多聚合苷酸激酶30酸化酶抗體 SCG2 Others Human 人 SCG2 / Secretogranin II 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

MX-1 人癌細(xì)胞 大鼠多配體蛋白聚糖1(SDC1)ELISA試劑盒 IL-4  大鼠白介素4 96T

PSD93： 突觸后密度蛋白93抗體 G-401細(xì)胞，人腎癌Wilms 人癌細(xì)胞,MX-1細(xì)胞 周細(xì)胞生長添加物PGS